原位雜交
服務(wù)簡介：
原位雜交組織(或細胞)化學 (In situ Hybridization Histochemistry, ISHH) 簡稱原位雜交(In Situ Hybridization)，屬于固相分子雜交的范疇，它是用標記的DNA或RNA為探針，在原位檢測組織細胞內(nèi)特定核酸序列的方法。根據(jù)所用探針和靶核酸的不同，原位雜交可分為DNA-DNA雜交，DNA-RNA雜交和RNA-RNA雜交三類。根據(jù)探針的標記物是否直接被檢測，原位雜交又可分為直接法和間接法兩類。直接法主要用放射性同位素、熒光及某些酶標記的探針與靶核酸進行雜交，雜交后分別通過放射自顯影、熒光顯微鏡術(shù)或成色酶促反應(yīng)直接顯示。間接法一般用半抗原標記探針，zui后通過免疫組織化學法對半抗原定位，間接地顯示探針與靶核酸形成的雜交體。
服務(wù)流程：
1. 根據(jù)客戶送的樣本（固定好或者包埋好），以及樣本類型，安排實驗
2.包埋或者切片后，根據(jù)客戶所測指標，設(shè)計特異性探針，標記示蹤物。然后進行一系列反應(yīng)。
3.（可選）根據(jù)上述所做好的切片進行拍片，分為熒光顯微鏡（激光共聚焦顯微鏡）或普通光學顯微鏡
4.（可選）針對做好的玻片進行分析，分析時選取較好的區(qū)域，分析三個視野
5.提供實驗報告：包括詳細的實驗方法及原位雜交實驗結(jié)果的相關(guān)圖表
操作步驟：
取材：
● 0.1M PBS (pH 7.2) 浸 5-10min。
● 0.1M甘氨酸/0.1M PBS 浸5min。
● 0.3%TritonX-100/0.1M PBS 浸10-15min。
● 0.1M PBS 洗 5min×3次，加蛋白酶K(1μg/ml)，37℃孵育30 min。
● 4%多聚甲醛浸5min。
● 0.1M PBS 洗 5min×2次，浸入新鮮配制的含0.25%乙酸酐/0.1M三乙醇胺中10min。
預雜交：滴加適量預雜交液，42℃ 30 min。
雜交：傾去預雜交液，在每張切片上滴加10-20μl雜交液（將探針變性后稀釋在預雜交液中，0.5 ng/μl ），覆以蓋玻片或蠟?zāi)ぃ?2℃ 過夜。（陰性對照）
洗片：(1) 4×SSC、2×SSC、1×SSC、0.5×SSC 37℃各洗20min；0.2×SSC 37℃洗10min；0.2×SSC與0.1M PBS各半洗10min；0.05M PBS 洗 5min×2次。
● 3% BSA/0.05M PBS 包被，37℃ 30min.
● 滴加抗地高辛-抗血清堿性磷酸酶復合物（以抗體稀釋液1:5000稀釋）4℃孵育過夜。
● 0.05M PBS洗15min×4次; TSM1 10min×2次; 新鮮配制TSM2 10min×2次。
顯色：在玻片上滴加適量顯色液，4℃避光過夜。
● 將玻片置于TE中10-30min以終止反應(yīng)。
● 酒精梯度脫水、二甲苯脫脂。
● 中性樹膠封片，顯微鏡下觀察結(jié)果
交貨內(nèi)容：
完整的實驗報告，包括實驗過程、所用儀器試劑、蠟塊玻片和相關(guān)分析數(shù)據(jù)
收費標準/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。
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