耐藥細(xì)胞株在不加任何條件下直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑，可使冰點(diǎn)降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
 

　　細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)速度要快，使之迅速通過(guò)細(xì)胞易受損的-5～0℃，細(xì)胞仍能生長(zhǎng)，活力受損不大。
 

　　耐藥細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)細(xì)胞中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)記的細(xì)胞，稱為細(xì)胞株。一般認(rèn)為細(xì)胞系是通過(guò)單細(xì)胞分離培養(yǎng)，或者通過(guò)篩選，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中必須始終存在細(xì)胞株的特殊特性或標(biāo)記。建立耐藥細(xì)胞株主要有兩種方法：藥物濃度遞增法和大劑量藥物沖擊法。
 

　　1、藥物濃度遞增法
 

　　其優(yōu)點(diǎn)是誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞藥物劑量逐步增加，細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境逐漸改變，細(xì)胞耐受性較好，狀態(tài)較好，但誘導(dǎo)耐藥過(guò)程耗時(shí)較長(zhǎng)，且化療藥物的作用方式與臨床常用的大劑量短療程化療原則有一定差異；
 

　　2、藥物大劑量沖擊法
 

　　其優(yōu)點(diǎn)是類似于臨床常用的大劑量化療藥物沖擊療法，但其缺點(diǎn)是藥物濃度較高，細(xì)胞培養(yǎng)可能因外環(huán)境突變而耐受，細(xì)胞狀態(tài)難以控制，耐藥能不穩(wěn)定。