細(xì)胞凋亡檢測(cè)是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。形態(tài)學(xué)檢測(cè)是研究細(xì)胞凋亡的基本方法。細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化是多階段的，起初，細(xì)胞間連接和微絨毛消失，細(xì)胞體積縮小，胞漿凝縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變疏松并與胞膜融合，形成一個(gè)個(gè)空泡，核糖體與線粒體等細(xì)胞器聚集，結(jié)構(gòu)尚無(wú)明顯改變，細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)逐漸凝聚成新月狀附在核膜周邊，細(xì)胞核固縮呈均一的致密物，進(jìn)而斷裂成碎塊，此時(shí)細(xì)胞膜仍保持完整：然后，胞膜及核膜不斷出芽、脫落，一個(gè)細(xì)胞變成數(shù)個(gè)大小不等的有膜包裹的凋亡小體：最后凋亡小體被周圍具有吞噬能力的細(xì)胞吞噬、消化。上述這些形態(tài)學(xué)的變化，可以通過(guò)本試劑盒中的染色及光學(xué)顯微鏡觀察。
 

　　選擇性結(jié)合磷脂酰絲氨酸。磷脂酰絲氨酸主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細(xì)胞都會(huì)把磷脂酰絲氨酸外翻到細(xì)胞表面，即細(xì)胞膜外側(cè)。磷脂酰絲氨酸暴露到細(xì)胞表面后會(huì)促進(jìn)凝血和炎癥反應(yīng)。而AnnexinV和外翻到細(xì)胞表面的磷脂酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷脂酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。
 

　　細(xì)胞凋亡檢測(cè)用帶有綠色熒光的熒光探針FITC標(biāo)記的AnnexinV，即AnnexinV-FITC，就可以用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡非常簡(jiǎn)單而直接地檢測(cè)到磷脂酰絲氨酸的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。本試劑盒還提供了碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)染色液，碘化丙啶可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對(duì)于壞死細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失，AnnexinV-FITC可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi)，與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。
 

　　細(xì)胞凋亡檢測(cè)的檢測(cè)優(yōu)勢(shì)
 

　　1.靈敏度高，背景干擾??；
 

　　2.可在組織及單細(xì)胞中檢測(cè)低水平凋亡；
 

　　3.后續(xù)進(jìn)行流式、熒光顯微鏡檢測(cè)，對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行定量；如聯(lián)合使用耦合顯色酶的抗熒光素抗體，能將熒光信號(hào)轉(zhuǎn)化為比色信號(hào)，用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)。