免疫沉淀是基于傳統(tǒng)親和純化方法開發(fā)的，在含有目的抗原的細(xì)胞裂解液中加入特定的抗體以及ProteinA-Beads（預(yù)先將ProteinA固定結(jié)合在磁珠上），根據(jù)抗原與抗體、ProteinA與抗體的FC的特異性，形成“抗原-抗體-ProteinA-Beads”復(fù)合物，清洗離心后去除溶液中未結(jié)合的雜蛋白，終檢測是否存在目的蛋白。與傳統(tǒng)的柱式親和純化相比，其目標(biāo)是僅分離足夠用于WesternBlot或其他檢測方法檢測的蛋白質(zhì)。通?？梢詫⒁烟幚砗臀刺幚淼臉悠愤M行比較，從而評估目標(biāo)蛋白的相對量。
在實驗中，用于檢測的抗體可以是預(yù)固定的，或者是游離的。通常，預(yù)固定抗體法更適用于IP，但是，當(dāng)目標(biāo)蛋白濃度較低、抗體與抗原的結(jié)合親和力較弱的情況下，可以使用游離的抗體形成免疫復(fù)合物，效果會比較好。
簡單的免疫沉淀可用于分離單個蛋白（抗體的靶抗原）以研究其特性、結(jié)果、表達(dá)、活化或修飾狀態(tài)。IP也用于研究初級抗體/蛋白與其他蛋白或核酸的相互作用。
主要類型：
1、免疫共沉淀（Co-IP）
免疫共沉淀是研究蛋白質(zhì)相互作用的常見技術(shù)，基本原理與IP相同。利用抗體共沉淀裂解物中與抗原結(jié)合的抗體或相關(guān)蛋白復(fù)合物。
2、染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）
可用于鑒定基因組中與DNA結(jié)合蛋白（如轉(zhuǎn)錄因子和組蛋白）結(jié)合的區(qū)域。將蛋白質(zhì)與DNA暫時交聯(lián)固定并剪切DNA，目標(biāo)蛋白與核酸序列一起被沉淀后進行DNA鑒定。
3、RNA免疫沉淀（RIP）
原理與ChIP相似，利用RNA結(jié)合蛋白被沉淀后，用RT-PCR或cDNA測序?qū)Τ恋磉M行RNA鑒定。
4、標(biāo)簽免疫沉淀
上述方法中均依賴特異性識別靶蛋白的抗體，需要抗體很少或不能與胞內(nèi)其他靶標(biāo)發(fā)生交叉反應(yīng)，存在局限性。但利用表位標(biāo)記蛋白，就可以使目的蛋白更易識別特定抗體并與之結(jié)合產(chǎn)生沉淀。
