蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗(yàn))即
WesternBlot。WesternBlot是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過(guò)特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過(guò)的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過(guò)分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。
蛋白質(zhì)印跡WesternBlot的一般認(rèn)為是美國(guó)斯坦福大學(xué)的喬治·斯塔克(GeorgeStark)。在尼爾·伯奈特(NealBurnette)于1981年所著的《分析生物化學(xué)》(AnalyticalBiochemistry)中被稱為WesternBlot。蛋白免疫印跡(WesternBlot)是將電泳分離后的細(xì)胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特異性抗體檢測(cè)某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基因在蛋白水平的表達(dá)研究、抗體活性檢測(cè)和疾病早期診斷等多個(gè)方面。
現(xiàn)常用的有底物化學(xué)發(fā)光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實(shí)驗(yàn)條件的是用*種方法，發(fā)表文章通常是用底物化學(xué)發(fā)光ECL。WesternBlot只要買(mǎi)現(xiàn)成的試劑盒就行，操作也比較簡(jiǎn)單，原理如下(二抗用HRP標(biāo)記):反應(yīng)底物為過(guò)氧化物+魯米諾，如遇到HRP，即發(fā)光，可使膠片曝光，就可洗出條帶。
免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物，可通過(guò)融合部分的抗體檢測(cè)。WesternBlot是檢測(cè)單一細(xì)胞蛋白表達(dá)量的方法；若要對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行細(xì)胞定位，confocal應(yīng)是的方法，若要進(jìn)行蛋白相互作用的關(guān)系，應(yīng)考慮免疫共沉淀技術(shù)。
